目的:探索吸入氫氣對慢性低氧性肺動脈高壓的影響。方法:(1)動物的分組及缺氧處理:將30只,4-6周大健康雄性清潔級C57小鼠(四川省實驗動物中心),重量(18-22)g,隨機(jī)分為3組:空白對照組(Control)、缺氧組(Hypoxia)、缺氧+氫氣吸入組(Hypoxia+H2)每組10只?？瞻捉M不做任何處理;缺氧組予置于氧倉吸入低氧混合氣體(10%O2+90%N2),每天8小時,其余時間置于常氧,持續(xù)28天;缺氧+氫氣吸入組在低氧混合氣體中加入氫氣(10%O2+4%H2+86%N2),其他與缺氧組相同。低氧處理28天后,取組織標(biāo)本檢查;(2)慢性缺氧模型檢驗:28天缺氧暴露結(jié)束后,予3%戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔注射,氣管插管,頸動脈采血后,即查血常規(guī),統(tǒng)計三組的紅細(xì)胞、血紅蛋白;(3)評估肺動脈高壓(Pulmonary arterial hypertension,PAH)模型:造模完成后,開胸取出心臟組織,分離左右心室并稱重,求得心室肥厚指數(shù)。取同一側(cè)同一肺段,4%多聚甲醛固定后,切片,HE染色,使用image processing program6.0測量小血管內(nèi)外徑,通過心室肥厚指數(shù)和肺微小動脈增生兩項間接指標(biāo)來反映;(4)肺損傷評估:肺組織HE染色后。使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察,參照Mikawa方法進(jìn)行肺病理評分;(5)肺組織炎性因子測定:肺組織勻漿后,提取組織液,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測。(6)肺組織丙二醛(malondialdehyde,MDA)測定:肺組織勻漿后,提取組織液,定量肺組織MDA。
結(jié)果:(1)紅細(xì)胞、血紅蛋白測定:缺氧組與缺氧+氫氣吸入組紅細(xì)胞數(shù)目和血紅蛋白量均增高,符合慢性缺氧血液系統(tǒng)變化,但缺氧組的變化最為顯著;(2)心室肥厚指數(shù)(Right Ventricular Hypertrophy Index,RVHI)和肺血管中膜厚度百分比(Wall thickness percentage,MT%)測定:缺氧組和缺氧+氫氣吸入組與對照組相比,RVHI均增高。缺氧組MT%增高,符合肺動脈高壓的病理學(xué)改變,氫氣吸入可改善PAH;(3)肺損傷評估:缺氧組肺病理評分較對照組增高,出現(xiàn)了肺組織間隙的充血和炎細(xì)胞的浸潤。缺氧+氫氣吸入組無明顯的肺損傷表現(xiàn);(4)炎性因子和MDA的檢測:Elisa測得腫瘤壞死因子(Turmor necrosis factor-α,TNF-α)和中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)以及肺組織MDA定量,在缺氧組和缺氧+氫氣吸入組均有增高,但缺氧+氫氣治療組較輕。
結(jié)論:吸入氫氣通過抗氧化、抗炎作用保護(hù)肺組織并改善肺動脈高壓。