目的探討氫氣對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)致急性腎損傷(acute kidney injury, AKI)大鼠的保護(hù)作用。

方法 SPF級(jí)雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,350～400 g,按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、模型組和氫氣治療組,每組12只大鼠。模型組和氫氣治療組采用大腦中動(dòng)脈穿刺法和造影劑復(fù)合甘露醇輸注模擬SAH模型;氫氣治療組大鼠在模型制備成功后24 h和48 h時(shí)置入預(yù)充2.9%濃度氫氣的麻醉誘導(dǎo)箱中2 h作為氫氣治療,模型組置入預(yù)充空氣的誘導(dǎo)箱;對(duì)照組除不刺破顱內(nèi)血管外,其他操作均與模型組相同。在模型制備成功后72 h取主動(dòng)脈血0.7～1.0 mL,檢測(cè)尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)和血肌酐(serum creatinine, SCr)水平。經(jīng)心臟灌注后腎組織取材,采用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining, HE)觀察大鼠腎臟病理變化;酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定大鼠腎臟組織活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)水平;蛋白印跡法測(cè)定大鼠腎臟組織B淋巴細(xì)胞瘤2 (B-cell lymphoma-2,bcl-2)、bcl-2相關(guān)蛋k(bcl-2 associated-k, bak)及裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表達(dá);免疫熒光法測(cè)定大鼠腎臟細(xì)胞凋亡率;在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中采用300μmol/L過(guò)氧化氫處理24 h腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)的方法制備氧化應(yīng)激模型,干預(yù)后24 h、48 h分別用2.9%濃度氫氣處理2 h,檢測(cè)腎上皮細(xì)胞內(nèi)丙二醛(malonaldehyde, MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)含量以及細(xì)胞凋亡率。結(jié)果模型組和氫氣治療組大鼠BUN和SCr水平高于對(duì)照組,氫氣治療組大鼠BUN和SCr水平低于模型組(P<0.05)。模型組和氫氣治療組大鼠腎小管損傷評(píng)分高于對(duì)照組,氫氣治療組大鼠腎小管損傷評(píng)分低于模型組(P<0.05)。模型組和氫氣治療組大鼠腎臟組織bcl-2/bak蛋白比值低于對(duì)照組,cleaved caspase-3蛋白表達(dá)高于對(duì)照組;氫氣治療組大鼠腎臟大鼠腎臟組織bcl-2/bak蛋白比值高于模型組,cleaved caspase-3蛋白表達(dá)低于模型組(P<0.05)。模型組和氫氣治療組大鼠腎臟細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組,氫氣治療組大鼠腎臟細(xì)胞凋亡率低于模型組(P<0.05)。模型組和氫氣治療組腎小管上皮細(xì)胞MDA水平和凋亡率高于對(duì)照組,SOD水平和存活率低于對(duì)照組;氫氣治療組腎小管上皮細(xì)胞MDA和凋亡率低于模型組,SOD和存活率高于模型組(P<0.05)。

結(jié)論氫氣對(duì)SAH致AKI大鼠具有保護(hù)作用,其機(jī)制與氫氣能減少ROS生成后抑制腎臟細(xì)胞凋亡有關(guān)。