研究目的:1.探究缺血再灌注后皮瓣中是否存在細(xì)胞壞死性凋亡現(xiàn)象。2.研究Nec-1(Necrostatin-1)對(duì)缺血再灌注皮瓣中的壞死性凋亡現(xiàn)象是否有抑制作用,另外這種抑制作用是否可以保護(hù)皮瓣,減少皮瓣缺血再灌注損傷。3.研究分子氫對(duì)于缺血再灌注皮瓣的保護(hù)作用是否是通過(guò)抑制皮瓣組織中壞死性凋亡這一途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。4.通過(guò)對(duì)于分子氫和Nec-1對(duì)于皮瓣中壞死性凋亡水平的影響作用進(jìn)行比較,另外還將兩者對(duì)于缺血再灌注皮瓣存活及血供情況的影響做對(duì)比,得到分子氫和Nec-1之間對(duì)于皮瓣的保護(hù)作用以及缺血再灌注皮瓣中壞死性凋亡的影響作用的差別。為今后皮瓣缺血再灌注損傷的防治研究方向提出可行的建議。研究方法:1.將雄性SD大鼠隨機(jī)均分為對(duì)照組(CTL組)和Nec-1組,每組15只。在對(duì)大鼠腹部皮瓣進(jìn)行缺血再灌注處理后的24h時(shí)間點(diǎn),測(cè)量皮瓣存活率以及血流量;之后對(duì)不同位置皮瓣組織進(jìn)行染色,觀察組織和細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;乃后將組織通過(guò)免疫組化及蛋白印跡試驗(yàn)(WB)的方式進(jìn)行研究,得到兩組間壞死性凋亡關(guān)鍵因子RIP1表達(dá)水平數(shù)據(jù)并進(jìn)行對(duì)比,判斷缺血再灌注皮瓣組織中是否有壞死性凋亡現(xiàn)象。2.根據(jù)不同組的處理方式,45只雄性SD大鼠均分為假手術(shù)組(SH組)、Nec-1組和CTL組。在皮瓣缺血再灌注后24h時(shí)間點(diǎn),測(cè)量皮瓣血流情況并由此獲得皮瓣存活率和血流灌注量,通過(guò)蘇木精&伊紅染色觀察組織的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況,而后使用TUNEL染色和電鏡觀察凋亡細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞形態(tài),通過(guò)免疫組織化學(xué)染色對(duì)壞死性凋亡關(guān)鍵因子RIP1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),判斷Nec-1是否可以通過(guò)抑制缺血再灌注皮瓣組織中的壞死性凋亡從而保護(hù)皮瓣組織,減少皮瓣壞死。3.成年SD雄性大鼠隨機(jī)分成CTL組、SH組和經(jīng)過(guò)分子氫處理的HCH組,每組15只。皮瓣缺血再灌注24h后測(cè)量皮瓣組織的存活率和血流灌注情況,并且對(duì)皮瓣組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察對(duì)壞死性凋亡關(guān)鍵因子表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),從而得到結(jié)果以證明分子氫對(duì)于缺血再灌注皮瓣的保護(hù)作用是通過(guò)減少其中的壞死性凋亡來(lái)達(dá)到的。4.取SD雄性大鼠60只,編號(hào)后隨機(jī)均分到以下幾組:SH組、HCH組、Nec-1組和CTL組。腹部皮瓣缺血再灌注24h后觀察皮瓣存活率和血流灌注情況,并且對(duì)組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,對(duì)壞死性凋亡關(guān)鍵因子表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。最后對(duì)比組間各項(xiàng)數(shù)據(jù),以判斷分子氫和Nec-1對(duì)于缺血再灌注皮瓣中的皮瓣存活率、血流灌注情況以及壞死性凋亡水平的影響是否有差別。

研究結(jié)果:1.在形態(tài)學(xué)觀察方面,Nec-1組中的皮瓣組織相較于CTL組,其炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況明顯為輕。在皮瓣存活率和皮瓣血供方面,Nec-1組相比CTL組有顯著提高。在壞死性凋亡水平方面,隨著組織與血管蒂的距離越來(lái)越遠(yuǎn),皮瓣組織中的壞死性凋亡關(guān)鍵因子RIP1表達(dá)水平逐漸上升,尤其是在距離血管蒂稍遠(yuǎn)的皮瓣區(qū)域,CTL組和Nec-1組有明顯差異。2.在形態(tài)學(xué)觀察方面,Nec-1組中的皮瓣組織炎性細(xì)胞明顯少于SH組和CTL組。在皮瓣組織存活方面,Nec-1組的皮瓣存活率和血流灌注情況雖然較SH組差,但明顯優(yōu)于CTL組。Nec-1組中的RIP 1表達(dá)水平則顯著低于CTL組,高于SH組。3.在應(yīng)用分子氫處理后,HCH組中的皮瓣組織壞死性凋亡水平明顯低于CTL組,但仍高于SH組。HCH組的皮瓣存活和血流灌注情況優(yōu)于CTL組,但較SH組差。4.與Nec-1相比,HCH組缺血再灌注皮瓣的存活率和血流灌注情況的影響并無(wú)顯著差異。但在對(duì)于壞死性凋亡水平的影響方面,HCH組中壞死性凋亡水平較Nec-1組明顯降低。研究結(jié)論:1.大鼠腹部缺血再灌注損傷皮瓣組織中存在壞死性凋亡現(xiàn)象;且皮瓣組織中的壞死性凋亡水平隨著缺血再灌注損傷加重逐漸升高。2.Nec-1可以通過(guò)抑制RIP1作用減少大鼠腹部皮瓣缺血再灌注損傷。3.分子氫可以抑制RIP1作用從而降低大鼠腹部缺血再灌注皮瓣中壞死性凋亡的水平,減少缺血再灌注皮瓣壞死。4.分子氫與Nec-1對(duì)于缺血再灌注損傷后的皮瓣保護(hù)作用相仿,但分子氫對(duì)于壞死性凋亡的抑制作用更強(qiáng)。