目的:膿毒血癥是重癥患者高病死率的原因之一,肺部往往早期受累,目前臨床上缺少對(duì)它行之有效的治療方法。氫氣吸入療法是近年來發(fā)現(xiàn)并用于治療炎癥性肺損傷的有效措施,但其具體作用機(jī)制不明。本課題旨在探究氫氣治療膿毒血癥肺損傷的作用機(jī)制,以期為氫氣在肺部炎癥疾病的臨床應(yīng)用提供參考。方法:(1)通過腹腔注射內(nèi)毒素建立小鼠膿毒血癥肺損傷模型,治療組給膿毒癥小鼠吸入4%濃度的氫氣8小時(shí)/天(08:00AM～16:00PM),觀察各組小鼠的7天生存率。(2)使用超聲檢測(cè)的方法觀察各組小鼠肺水腫、肺部血流及心率的變化。(3)通過HE染色、免疫組化和免疫熒光觀察各組小鼠的肺出血、肺水腫和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況。(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠外周血中性粒細(xì)胞比例。(5)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)小鼠血清IL-6的含量。(6)體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞株和HUVEC-C細(xì)胞株模擬機(jī)體膿毒血癥,觀察氫氣對(duì)內(nèi)毒素感染后的單核巨噬系和血管內(nèi)皮細(xì)胞的治療效果。(7)通過蛋白免疫印跡、明膠酶譜、免疫熒光共定位的方法檢測(cè)氫氣對(duì)Trx1、TF和MMP-9的影響,并通過硫氧還蛋白(Trx1)抑制劑PX12阻斷Trx1表達(dá),驗(yàn)證氫氣通過Trx1發(fā)揮抗炎作用。

結(jié)果:氫氣吸入治療能顯著提高膿毒癥小鼠的7天生存率,減少肺出血、肺水腫、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和血漿IL-6濃度。氫氣可提高膿毒癥小鼠肺和血液中Trx1含量,降低TF表達(dá)和MMP-9活性。在體外實(shí)驗(yàn)中,通過LPS刺激THP-1細(xì)胞和HUVECC細(xì)胞,搜集相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞進(jìn)性分析,結(jié)果顯示氫氣可以降低TF表達(dá)和MMP-9活性,用Trx1抑制劑PX12阻斷Trx1活化,氫氣降低TF表達(dá)和MMP-9活性的作用被取消。結(jié)論:氫通過激活Trx1降低TF表達(dá)和MMP-9活性,減輕膿毒癥小鼠肺損傷,提高小鼠生存率。氫靶向Trx1可能是減輕膿毒癥肺損傷的一種潛在機(jī)制。