研究目的:本論文通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)研究富氫水對(duì)酒精誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用。方法:在細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)建立人正常肝細(xì)胞(hepatocyte cell lines,LO2)的酒精性損傷模型來(lái)研究富含氫氣的細(xì)胞培養(yǎng)基(Hydrogen-rich Culture Medium,HCM)在體外對(duì)人肝細(xì)胞的保護(hù)作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,我們使用ICR品系小鼠建立兩種酒精誘導(dǎo)的肝損傷小鼠模型;通過(guò)大劑量、短時(shí)間給予小鼠50%(v/v)濃度的乙醇灌胃后構(gòu)建急性酒精性肝損傷的小鼠模型來(lái)研究富氫生理鹽水(Hydrogen-rich Saline,HS)對(duì)此類(lèi)模型小鼠肝臟的保護(hù)作用;同時(shí),為了進(jìn)一步研究富氫生理鹽水對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷的保護(hù)效果,我們使用同樣品系的小鼠通過(guò)梯度地、長(zhǎng)時(shí)間地灌胃50%(v/v)濃度乙醇的方式構(gòu)建慢性酒精性肝損傷的小鼠模型。使用CCK-8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞增殖率并篩選出最佳的乙醇濃度來(lái)建立肝細(xì)胞的酒精性損傷模型;測(cè)定細(xì)胞增殖率和細(xì)胞內(nèi)外的生化指標(biāo)含量來(lái)綜合比較不同處理組中細(xì)胞的損傷程度。具體地,在小鼠實(shí)驗(yàn)中,首先使用50%體積分?jǐn)?shù)的乙醇以灌胃方式分別構(gòu)建急性酒精性肝損傷小鼠模型和慢性酒精性肝損傷的小鼠模型,同時(shí)在兩種建模的過(guò)程中給予各組小鼠不同的藥物處理;然后使用各種生化檢測(cè)試劑盒分別去測(cè)定小鼠血清中和小鼠肝臟組織中與肝功能相關(guān)的生化指標(biāo)含量;最后制作蘇木素-伊紅(HE)染液染色的小鼠肝臟組織生理切片來(lái)觀察小鼠肝臟結(jié)構(gòu)的變化情況。結(jié)果:在細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中,CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明與乙醇組中的細(xì)胞相比,富氫培養(yǎng)基組中細(xì)胞的增殖率顯著提高;同時(shí)生化試劑盒測(cè)定的細(xì)胞生化指標(biāo)結(jié)果也證明富氫水能夠顯著改善由酒精損傷而導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)外生化指標(biāo)含量的大幅度變動(dòng)。在小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,無(wú)論是在急性酒精性肝損傷小鼠模型還是慢性酒精性肝損傷小鼠模型中,我們都發(fā)現(xiàn)富氫水能夠顯著改善由于乙醇所導(dǎo)致的相關(guān)肝功能生化指標(biāo)含量的上升或下降,并且小鼠肝臟組織的HE染色切片結(jié)果顯示富氫生理鹽水組中的小鼠肝臟結(jié)構(gòu)基本保持正常形態(tài)。

結(jié)論:通過(guò)本課題研究,我們初步證明富氫培養(yǎng)基能夠在體外提高肝臟細(xì)胞的增殖率,糾正肝臟細(xì)胞因酒精而導(dǎo)致的生化指標(biāo)含量紊亂情況,在小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,富氫生理鹽水既穩(wěn)定了兩種損傷模型小鼠相關(guān)肝功能指標(biāo)含量也較好地保護(hù)了小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)不受酒精的損傷。所以,綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本研究初步證明了富氫水對(duì)酒精誘導(dǎo)的肝損傷有較好的保護(hù)效果。