氫氣聯(lián)合自然殺傷細(xì)胞對肺癌細(xì)胞生長的影響
目的：研究不同濃度氫氣聯(lián)合自然殺傷(NK)細(xì)胞是否有助于抑制肺癌細(xì)胞生長。
方法：從非小細(xì)胞肺癌患者外周血中分離和培養(yǎng)NK細(xì)胞，用20%、40%、60%不同濃度氫氣分別處理NK細(xì)胞。通過四甲基偶氮唑藍(lán)法檢測NK細(xì)胞生長曲線、流式細(xì)胞儀分析NK細(xì)胞周期、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分析NK細(xì)胞分泌炎癥因子的變化來評估氫氣對NK細(xì)胞的增殖能力影響。將NK細(xì)胞和A549細(xì)胞(肺癌細(xì)胞)1∶1加入共培養(yǎng)體系，用20%、40%、60%不同濃度氫氣分別處理，通過觀察A549細(xì)胞單克隆形成能力、劃痕分析A549細(xì)胞遷移能力、Transwell分析A549細(xì)胞侵襲能力來評估氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞殺瘤能力。
結(jié)果：20%、40%、60%不同濃度的氫氣對NK細(xì)胞的增殖能力影響有限。在A549細(xì)胞單克隆生長能力和細(xì)胞遷移能力方面，60%的氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞有輕度抑制作用，20%、40%濃度的氫氣和單獨(dú)NK細(xì)胞作用無差別；Transwell分析細(xì)胞侵襲能力提示20%、40%、60%不同濃度氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞與單獨(dú)NK細(xì)胞對A549細(xì)胞侵襲能力無差別。
結(jié)論：60%高濃度氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞有助于抑制A549細(xì)胞單克隆生長和細(xì)胞遷移能力，從而抑制腫瘤生長，為今后進(jìn)一步科學(xué)研究和氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞免疫治療肺癌奠定了基礎(chǔ)。
夏盛全, 任濤, 王凱玲, 等. 氫氣聯(lián)合自然殺傷細(xì)胞對肺癌細(xì)胞生長的影響 [J] . 國際呼吸雜志,2019,39 (24): 1863-1869. 作者單位：同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院呼吸內(nèi)科,上海,200123
氫氣作為一種新型抗氧化劑，近年來受到越來越多的學(xué)者關(guān)注。它通過多種作用方式保護(hù)機(jī)體，在缺血再灌注損傷、神經(jīng)系統(tǒng)損傷、電離輻射損傷、代謝綜合征等疾病方面有著顯著的預(yù)防和治療作用。
自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要成員，其不需要抗原預(yù)先致敏，不依賴抗體與補(bǔ)體，也無組織相容性復(fù)合物(MHC)限制性，能快速、直接殺傷腫瘤細(xì)胞，是機(jī)體腫瘤免疫中的第一道防線。
本研究通過氫氣對非小細(xì)胞肺癌患者NK細(xì)胞的增殖能力作用、殺瘤能力作用的研究，探討氫氣對非小細(xì)胞肺癌患者NK細(xì)胞功能的影響，為今后的臨床研究提供新思路，指導(dǎo)臨床應(yīng)用。
NK 細(xì)胞作為 天 然 免 疫 應(yīng) 答 中 關(guān) 鍵 的 效 應(yīng) 細(xì)胞，是一群不同于 T、B 淋巴細(xì)胞的大顆粒淋巴細(xì)胞，分布于外周各淋巴器官及血液循環(huán)系統(tǒng)，無需抗原的預(yù)先刺激與活化即可發(fā)揮細(xì)胞毒效應(yīng)，并可分泌多種細(xì)胞因子及趨化因子。它可以非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞，是機(jī)體免疫監(jiān)視系統(tǒng)中的一個重要組成部分，同時能夠產(chǎn)生 IFN-γ和 IL-４ 等細(xì)胞因子，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)。其細(xì)胞表面標(biāo)志主要是 CD1 6和 CD5 6。近年來，關(guān)于 NK 細(xì)胞過繼性免疫治療腫瘤的研究與日俱增，已逐漸開展臨床應(yīng)用并獲得一定的療效。
本研究選擇了外周血 CD16+ CD56+為研究對象，觀察 20%、40%、60% 不 同濃度氫氣對NK細(xì)胞的功能影響。由MTT檢測可知，與正常細(xì)胞相比，60%的氫氣處理細(xì)胞，48h后對NK細(xì)胞增殖生長略微有些抑制作用;而從細(xì)胞因子的分泌來看，60%氫氣使NK細(xì)胞分泌IFN-γ有些上升，使NK細(xì)胞分泌IL-４有些下降，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而20%、40%的氫氣無論對NK細(xì)胞增殖還是細(xì)胞因子分泌上來看，均無明顯影響。由流式細(xì)胞儀檢測可知:與正常細(xì)胞相比，20%、40%、60%不同濃度的氫氣處理NK細(xì)胞后，對細(xì)胞周期影響不大。這說明20%、40%、60%不同濃度的氫氣對NK細(xì)胞的增殖無明顯促進(jìn)和抑制作用，對細(xì)胞周期影響不大。在NK細(xì)胞與A549細(xì)胞共培養(yǎng)體系中，加入20%、40%、60%不同濃度氫氣觀察NK細(xì)胞殺瘤能力，發(fā)現(xiàn)在A549細(xì)胞單克隆生長能力和細(xì)胞遷移能力方面，60%的氫氣有輕度抑制作用，20%、40%濃度的氫氣與NK細(xì)胞和A549細(xì)胞正常培養(yǎng)的作用無差別。Transwell分析細(xì)胞侵襲能力方面，與NK細(xì)胞和A549細(xì)胞正常培養(yǎng)相比，20%、40%、60%不同濃度的氫氣處理對A549細(xì)胞侵襲能力沒差別。最近有學(xué)者研究表明，氫氣能抑制癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，也能促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡。更有意思的是，氫氣能誘導(dǎo)肺癌A549和H1945細(xì)胞發(fā)生G2／M阻滯。細(xì)胞周期是一個受嚴(yán)密調(diào)控的有序發(fā)生的事件，基因組DNA完成復(fù)制，隨后基因組均等地分裂成2個相似的細(xì)胞。細(xì)胞周期調(diào)控需要大量的胞內(nèi)外信號的配合，如果缺乏適當(dāng)?shù)男盘枺?xì)胞將不能從一個階段進(jìn)入下一個階段，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞周期阻滯。
本研究表明，在確保安全前提下，60%濃度的氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞有助于抑制A5４9細(xì)胞單克隆生長和細(xì)胞遷移能力，從而抑制腫瘤生長，它們之間存在的作用是否為協(xié)同作用，以及存在的作用機(jī)制需要今后科學(xué)研究和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的開展進(jìn)一步證實(shí)。根據(jù)NK細(xì)胞表面CD56密度的不同，可將其分CD56dim和CD56bright2種亞型，人體90%以上的NK細(xì)胞為高表達(dá)IgG低親和力Fc受體(FcγRⅢ，即CD16)且具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒效應(yīng)的CD56dim細(xì)胞，而可產(chǎn)生大量細(xì)胞因子的CD56 bright細(xì)胞不到10%。研究指出，CD56 bright亞型的NK細(xì)胞本身具有一定的抗氧化能力。本次研究只針對CD56+NK細(xì)胞，未能細(xì)分CD56亞型，或許NK細(xì)胞與氫氣的抗氧化效應(yīng)是否有協(xié)同作用尚未可知，但筆者觀察到了60%高濃度氫氣聯(lián)合NK細(xì)胞有助于抑制A549細(xì)胞單克隆生長和細(xì)胞遷移能力，從而抑制腫瘤生長，達(dá)到治療的目的。這為今后氫氣和NK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合治療肺癌奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。但氫氣的濃度上限和體內(nèi)試驗(yàn)療效以及涉及的分子機(jī)制和信號通路有待于進(jìn)一步研究和論證。
了解完專業(yè)的氫知識后，我們應(yīng)該選擇一款怎么樣的氫設(shè)備呢？
氫力泉吸氫機(jī)采用SPE方式電解技術(shù)核心是，并采用美國杜邦117膜，鉑金鍍層?？蓪?shí)現(xiàn)99.99%以上的氫氣純度。并獲得歐盟CE國際認(rèn)證書及吸氫機(jī)的純度、流量的數(shù)據(jù)檢測報(bào)告，保證吸氫機(jī)輸出氫氣純度高、壓力穩(wěn)定、持續(xù)。
