目的:觀察富氫鹽水對腸缺血再灌注大鼠腸黏膜組織病理學變化及凝血功能的影響;并探討其發(fā)揮作用的相關機制。
方法:選擇西南醫(yī)科大學實驗動物中心的SPF級成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只,體重范圍在220-250g之間,隨機分為假手術組(SHAM組)、腸缺血再灌注組(I/R組)和富氫鹽水處理缺血再灌注組(I/R+H2組),每組各16只;大鼠腸缺血再灌注模型,通過使用無創(chuàng)動脈夾夾閉大鼠腸系膜上動脈90min后再灌注2h來建立;在再灌注前10min時經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水或富氫鹽水,劑量均為10ml/kg。從每個組中隨機選取8只大鼠,先經(jīng)過腹主動脈取血3ml(中段血),通過全自動凝血儀檢測凝血功能相關指標,包括PT(凝血酶原時間)、APTT(活化部分凝血活酶時間)、TT(凝血酶時間)、FIB(纖維蛋白原)、FDP(纖維蛋白原降解產(chǎn)物)、D-Di(D-二聚體)、PT-INR(國際標準化比值)。然后取1cm小腸組織(距回腸末端5cm處),經(jīng)4%多聚甲醛固定后,進行蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色,用于觀察小腸組織病理學形態(tài)改變,并進行Chiu’s病理學評分。另外,每組剩余的8只大鼠,均經(jīng)過腹主動脈取血7ml,一部分血液標本靜置2h后離心吸取上清液,通過ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附法)檢測TNF-α(腫瘤壞死因子α)、IL-6(白介素-6)、TF(組織因子)的水平;另一部分血液標本用于分離其中的單個核細胞,然后提取單個核細胞的蛋白,再通過Western Blot(蛋白免疫印跡法)檢測NF-κB蛋白的表達情況。使用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析,多個樣本均數(shù)之間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA),兩兩比較采用最小顯著性差異檢驗(least significant difference,LSD),P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1、與SHAM組比較,I/R組和I/R+H2組的腸黏膜Chiu’s評分明顯升高,腸黏膜損傷嚴重,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與I/R組比較,I/R+H2組腸黏膜Chiu’s評分降低,腸黏膜損傷相對較輕,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。2、與SHAM組比較,I/R組和I/R+H2組的PT、APTT、TT、FDP、D-Di、PT-INR水平升高,FIB水平降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與I/R組比較,I/R+H2組PT、APTT、TT、FDP、D-Di、PT-INR水平降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),FIB水平升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3、與SHAM組比較,I/R組和I/R+H2組的TNF-α、IL-6、TF水平及單個核細胞NF-κB蛋白水平升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與I/R組比較,I/R+H2組TNF-α、IL-6、TF水平及單個核細胞NF-κB蛋白表達水平降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
結(jié)論:1、腸缺血再灌注損傷后出現(xiàn)凝血功能紊亂,血液呈高凝狀態(tài),TNF-α、IL-6和TF水平升高及NF-κB通路的激活可能是其關鍵所在;2、富氫鹽水可減少炎癥因子及組織因子的分泌釋放,并可抑制NF-κB通路激活,從而改善凝血功能紊亂。