研究背景和目的:子宮內(nèi)膜異位癥（Endometriosis,EMT）是指具有活性的子宮內(nèi)膜組織異位到子宮腔之外的部位生長,引起患者出現(xiàn)慢性盆腔痛、痛經(jīng)以及不孕等表現(xiàn),是一種雌激素依賴的良性疾病,影響5%10%的育齡期女性。目前的治療方法多數(shù)以降低雌激素為目標(biāo),但治療的副作用是出現(xiàn)類似更年期的癥狀,以致患者無法耐受而中斷治療,導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)。因此,需要探索新的治療方法以緩解EMT患者的臨床癥狀,并減少副作用,提高生活質(zhì)量。雖然目前各種學(xué)說尚無法完全解釋EMT的發(fā)病原因,但越來越多的研究發(fā)現(xiàn)EMT存在氧化與抗氧化的失衡。EMT患者體內(nèi)氧化應(yīng)激的增加可能是導(dǎo)致疾病的病因,但也可能是EMT病理生理學(xué)的一個結(jié)果。近期也有報道指出抗氧化劑對EMT的治療是有效的。因此,EMT的抗氧化治療是值得進(jìn)一步研究的,并且具有很強(qiáng)的臨床應(yīng)用前景。氫氣,一直被認(rèn)為是一種惰性氣體,醫(yī)學(xué)方面主要用來預(yù)防潛水病。2007年首次報道了氫氣可以作為一種抗氧化劑,通過選擇性地減少氧化應(yīng)激從而保護(hù)大腦的缺血再灌注損傷。這篇文章一經(jīng)報道,便引起了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注,許多研究也已證明氫分子的抗氧化能力在多種疾病的治療中是有效的。此外,氫氣與其他抗氧化劑相比,具有安全、高效、低價等優(yōu)點(diǎn)。本實驗通過選擇雌性SD大鼠為實驗對象,先建立穩(wěn)定的EMT大鼠模型,然后評估呼吸氫氣對EMT大鼠的保護(hù)作用并初步探討其作用機(jī)制。

實驗方法:1.建立EMT動物模型:取雌性SD大鼠,采用自體移植方法,將自體子宮內(nèi)膜組織分別移植于卵巢、宮骶韌帶及腹壁上,建立EMT模型。2.實驗動物分組與處理:（1）模型組（EMT）:子宮內(nèi)膜異位癥大鼠;（2）氫氣治療組（EMT+P1H2）:大鼠在手術(shù)建模后4周起予以呼吸67%氫氣+33%氧氣的混合氣體（每天1次,1小時/次）,連續(xù)4周;（3）氫氣預(yù)防組（EMT+P2H2）:大鼠在手術(shù)建模后立即予以呼吸67%氫氣+33%氧氣的混合氣體（每天1次,1小時/次）,連續(xù)4周;（4）氮?dú)庵委熃M（EMT+P1N2）:大鼠在手術(shù)建模后4周起予以呼吸67%氮?dú)?33%氧氣的混合氣體（每天1次,1小時/次）,連續(xù)4周;（5）氮?dú)忸A(yù)防組（EMT+P2N2）:大鼠在手術(shù)建模后立即予以呼吸67%氮?dú)?33%氧氣的混合氣體（每天1次,1小時/次）,連續(xù)4周。3.檢測指標(biāo):建模后8周再次手術(shù)進(jìn)行取材,對移植物進(jìn)行大體及組織學(xué)觀察,測量移植物總質(zhì)量,對移植物進(jìn)行增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、COX-2及MMP-9的蛋白和基因檢測,檢測大鼠血清及移植物組織中的氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、SOD、GSH及CAT的含量。實驗結(jié)果:1.采用自體移植方法可建立穩(wěn)定的EMT動物模型:卵巢、宮骶韌帶及腹壁3個部位的自體子宮內(nèi)膜移植物均可形成內(nèi)膜異位病灶,建模成功率均較高,且3個部位之間的成模率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。2.呼吸67%氫氣可顯著抑制異位子宮內(nèi)膜的生長:EMT+P1H2組和EMT+P2H2組移植物的總質(zhì)量均小于EMT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）,而EMT+P1N2和EMT+P2N2組與EMT組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。此外,EMT+P1H2組和EMT+P2H2組異位內(nèi)膜的PCNA+細(xì)胞計數(shù)均少于EMT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）,而EMT+P1N2組和EMT+P2N2組與EMT組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。3.呼吸67%氫氣可明顯減少氧化應(yīng)激損傷:與EMT組相比,EMT+P1H2組和EMT+P2H2組大鼠血清及異位內(nèi)膜組織中的SOD、GSH和CAT活性增加,而MDA含量降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）,但EMT+P1N2和EMT+P2N2組與EMT組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4.呼吸67%氫氣可降低MMP-9和COX-2的蛋白和基因表達(dá):EMT+P1H2組和EMT+P2H2組大鼠異位內(nèi)膜組織中的MMP-9+和COX-2+細(xì)胞計數(shù)均低于EMT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）,而EMT+P1N2和EMT+P2N2組與EMT組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。EMT+P1H2和EMT+P2H2組大鼠異位內(nèi)膜中MMP-9-mRNA和COX-2-mRNA的基因表達(dá)均低于EMT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）,但EMT+P1N2和EMT+P2N2組與EMT組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)論:通過本實驗發(fā)現(xiàn)采用自體移植方法可建立穩(wěn)定的子宮內(nèi)膜異位癥動物模型。呼吸67%H2+33%O2混合氣體對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的預(yù)防及治療都有一定的作用,高濃度氫氣的吸入可能在子宮內(nèi)膜異位癥的治療中具有潛在的臨床實踐意義。