目的膿毒癥是臨床常見的危重癥,急性肺損傷（ALI）是其嚴重并發(fā)癥,死亡率較高。線粒體功能障礙與膿毒癥關(guān)系密切。自噬可選擇性降解損傷的線粒體,維持自身穩(wěn)態(tài)。近年來發(fā)現(xiàn)氫氣對多種疾病具有治療作用。本課題組前期研究表明氫氣可減輕膿毒癥小鼠ALI,但其具體作用機制及靶點尚不十分清楚。本研究擬觀察氫氣吸入對膿毒癥小鼠肺組織自噬相關(guān)蛋白LC3表達的影響,探討其與線粒體功能的關(guān)系,為進一步闡明氫氣對膿毒癥小鼠ALI的治療機制提供理論基礎(chǔ)。
方法雄性ICR小鼠156只,6周齡,體重20～25 g,采用隨機數(shù)字表法,將其分為6組（n--26）:假手術(shù)組（Sham組）、假手術(shù)+氫氣組（Sham+H2組）、膿毒癥組（CLP組）和膿毒癥+氫氣組（CLP+H2組）、膿毒癥+自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤組（CLP+3-MA組）、膿毒癥+自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤組+氫氣組（CIP+3-MA+H2組）。采用盲腸結(jié)扎穿孔法制備中度膿毒癥模型,于術(shù)前1 h時CLP+3-MA組和CLP+3-MA+H2組腹腔注射自噬抑制劑3-MA 10 mg/kg,于術(shù)后1、6 h時Sham+H2組、CLP+H2組和CLP+3-MA+H2組分別吸入2%氫氣1 h。每組取20只小鼠,記錄術(shù)后1、2、3、5、7d時生存情況;每組術(shù)后1d時取6只小鼠,采集頸動脈血樣,測定PaO2,計算氧合指數(shù)PaO2/FiO2;然后取肺組織,行肺組織病理學評分;分離肺組織線粒體,采用Clark氧電極法測呼吸控制率（RCR）,分光光度計法檢測線粒體膜電位（MMP）;螢光素酶法檢測線粒體ATP含量;采用WesternBlot法和免疫熒光法測定自噬蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）的表達;結(jié)果與Sham組比較,CLP組和CLP+H2組生存率降低,肺組織病理學評分升高,氧合指數(shù)、肺組織線粒體RCR、MMP和ATP含量降低,自噬相關(guān)蛋白LC3表達增加（P<0.05）;與CLP組比較,CLP+H2組生存率升高,肺組織病理學評分降低,氧合指數(shù)、肺組織線粒體RCR、MMP和ATP含量升高,自噬相關(guān)蛋白LC3表達顯著增加（P<0.05）。3-MA抑制了LC3的表達,膿毒癥小鼠肺組織線粒體功能下降,氫氣的保護作用逆轉(zhuǎn)（P<0.05）。說明3-MA通過抑制LC3的表達,從而進一步抑制氫氣對膿毒癥小鼠的保護性作用。

結(jié)論中度膿毒癥可損害肺組織線粒體功能,使自噬水平代償性增高;氫氣上調(diào)自噬水平,改善膿毒癥小鼠肺組織線粒體功能,進而減輕肺損傷。