這是一篇2013年發(fā)表在國(guó)際著名期刊《臨床與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)》的研究論文，題目是：富氫水對(duì)慢性乙型肝炎患者氧化應(yīng)激，肝功能和病毒載量的影響。

　　研究結(jié)果表明，常規(guī)改善組的氧化應(yīng)激保持不變，而氫改善組則明顯改善。氫氣水的改善后，肝功能明顯改善，HBV DNA明顯降低。盡管改善后兩組之間的氧化應(yīng)激存在顯著差異，但改善后肝功能和HBV DNA水平相當(dāng)，且趨勢(shì)均有改善。

　　介紹

　　乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的潛在威脅生命的肝臟感染，是全球主要的健康問(wèn)題，也是最嚴(yán)重的病毒性肝炎類(lèi)型。

　　根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)，全世界估計(jì)有20億人感染了HBV，超過(guò)2.4億人患有慢性肝感染。由于乙型肝炎的急性或慢性后果，每年約有60萬(wàn)人死亡。乙型肝炎在中國(guó)和亞洲其他地區(qū)是地方性流行。

　　在中國(guó)，大約有9300萬(wàn)慢性HBV感染患者，其中2000萬(wàn)患有慢性乙型肝炎(CHB)。但是，肝炎的發(fā)病機(jī)理仍知之甚少。

　　迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激在肝炎的發(fā)病機(jī)理中起重要作用。反應(yīng)性氧物質(zhì)(ROS)和誘導(dǎo)的ROS的脂質(zhì)過(guò)氧化(LPO)涉及病毒性肝炎的病理學(xué)和已被視為肝損傷的一個(gè)主要原因。研究已證實(shí)在慢性乙肝患者的氧化還原失衡。

　　2007年，大澤等人。發(fā)現(xiàn)氫可通過(guò)選擇性還原包括羥基自由基(·OH)和過(guò)氧亞硝酸鹽(ONOO –)在內(nèi)的細(xì)胞毒性氧自由基來(lái)作為改善性抗氧化劑。

　　在以前的研究中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在許多動(dòng)物模型中，吸入氫氣以及腹膜內(nèi)和口服給予富氫水都可以起到保護(hù)作用，包括缺血/再灌注損傷和許多器官的炎癥。然而，氫對(duì)病毒誘導(dǎo)的炎癥包括肝炎的保護(hù)作用尚未迄今報(bào)道。

　　這項(xiàng)研究旨在研究富氫水對(duì)氧化應(yīng)激(超氧化物歧化酶[SOD];谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶[GST];黃嘌呤氧化酶[XOD];丙二醛[MDA])，肝功能(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶[ALT])的影響。 CHB患者的總膽汁酸[TbiL]，膽堿酯酶[ChE])和HBV負(fù)荷。

　　這項(xiàng)研究可為富氫水在CHB改善中的臨床應(yīng)用提供證據(jù)。
 

　　主題與方法

　　選題集

　　招募了三十名進(jìn)行常規(guī)身體檢查的健康受試者(男25例;女5例)作為對(duì)照。他們沒(méi)有影響心臟，肝臟，腎臟和肺等重要器官的系統(tǒng)疾病。肝，腎功能正常，無(wú)病毒性肝炎或不是病毒性肝炎的攜帶者。平均年齡為35.8±12.2歲(范圍：20-55歲)。

　　納入標(biāo)準(zhǔn)：從2010年8月至2010年9月，招募了中度CHB住院患者(n = 60)。男性49例，女性11例。這些患者被隨機(jī)分為氫氣改善組或常規(guī)改善組(每組n = 30)。CHB的診斷基于慢性乙型肝炎的預(yù)防和改善指南。2

　　排除標(biāo)準(zhǔn)：排除甲，丙，丁和戊型肝炎，酒精性肝炎，藥物性肝炎和自身免疫性肝炎。排除了腫瘤，血液病，心臟病，高血壓，甲狀腺功能亢進(jìn)癥，糖尿病，妊娠，肝硬化和神經(jīng)精神疾病。常規(guī)改善組男24例，女6例，平均年齡36.8±15.2歲。在氫改善組中，男25例，女5例，平均年齡35.3±11.1歲。

　　這是一項(xiàng)對(duì)照，隨機(jī)，盲目的研究。整個(gè)研究方案經(jīng)淮安市第四人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究前已獲得知情同意書(shū)。
 

　　改善

　　在常規(guī)改善組中，患者接受常規(guī)改善，并在設(shè)計(jì)的時(shí)間點(diǎn)向患者施用無(wú)氫水。在氫改善組中，除常規(guī)改善外，每天連續(xù)六周(每天1200-1800毫升)口服三次富含氫的水(上午8-9點(diǎn);下午14-15點(diǎn);下午18-19點(diǎn))。9

　　所有受試者在研究前1周內(nèi)未接受其他抗氧化劑改善。在改善6周之前和之后的早晨，采集空腹靜脈血(4 mL)。以3,000 rpm離心5分鐘后，收集血清并將其保存在–70°C下以備后用。
 

　　制備富氫水

　　通過(guò)將金屬鎂棒放入飲用水(Mg + 2H 2 O→Mg(OH)2 + H 2)中來(lái)生產(chǎn)富氫水;最終氫濃度：0.55-0.65 mM。鎂棒在聚丙烯和陶瓷容器中包含99.9%的純金屬鎂和天然寶石。9，10
 

　　檢測(cè)

　　用XOD法檢測(cè)SOD活性，用化學(xué)比色法檢測(cè)GST和XOD，用硫代巴比妥酸比色法檢測(cè)MDA。試劑購(gòu)自南京建城生物技術(shù)有限公司(中國(guó)南京)，并根據(jù)制造商的說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR

　　使用熱循環(huán)儀(ABI 5700; Applied Biosystems，美國(guó)加利福尼亞州福斯特市)進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR，以測(cè)量HBV DNA(20120114;大安基因生物技術(shù)有限公司，中國(guó)廣州)。檢測(cè)下限為10 3拷貝/ mL。

　　肝功能檢測(cè)

　　ALT，TbiL和ChM用自動(dòng)生化分析儀(TBA-120R;日本東芝，日本東京)測(cè)量，試劑(編號(hào)：12125)購(gòu)自Whiteman Biotech Co.，Ltd.(中國(guó)，南京)。根據(jù)制造商的說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。
 

　　統(tǒng)計(jì)分析

　　使用Windows的SPSS 16.0版(SPSS，Chicago，IL，美國(guó))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(骨灰盒：x-wiley：17528054：cts12076：equation：cts12076-math-0001x± s)。

　　三組之間的比較是通過(guò)方差分析進(jìn)行的，隨后是事后檢驗(yàn)和紐曼-基爾斯檢驗(yàn)。但是，氫改善組與常規(guī)改善組之間的比較是通過(guò)t檢驗(yàn)進(jìn)行的。定性數(shù)據(jù)以百分比表示，并用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。p <0.05的值被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
 

　　結(jié)果

　　兩組患者基線時(shí)的特征

　　總共招募了185名CHB患者，其中101名符合納入標(biāo)準(zhǔn)。然后，將84例患者隨機(jī)分為常規(guī)改善組(n = 41)和氫改善組(n = 43)。

　　在研究結(jié)束時(shí)，常規(guī)改善組的30例患者和氫氣改善組的30例患者被納入最終分析(圖 1)。表 1顯示了CHB患者的特征。在常規(guī)改善組和氫改善組之間，基線時(shí)的性別，年齡，HBeAg陽(yáng)性率，ALT和HBV DNA水平無(wú)明顯差異。此外，對(duì)照組和CHB患者在基線時(shí)的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著差異。

　　表1. 常規(guī)改善組和氫改善組中基線CHB患者的特征

　　患者招募流程圖。

　　不同組氧化應(yīng)激相關(guān)參數(shù)的變化

　　如表 2所示，健康受試者與CHB患者改善前后SOD，GST，MDA和XOD的差異顯著(p <0.01)。這些參數(shù)在健康受試者和常規(guī)改善組中保持不變。

　　此外，與處理前相比，氫處理后SOD和GST活性顯著增加，MDA和XOD活性顯著下降(p <0.01)。此外，與常規(guī)改善組相比，改善后氫改善組的SOD和GST活性顯著增加，MDA和XOD顯著降低(p<0.01)。

　　值得注意的是，富氫水處理后的SOD和GST活性高于對(duì)照組。

　　表2. 不同組改善前后的氧化應(yīng)激參數(shù)

　　注意

　　一個(gè) p<0.05相對(duì)于對(duì)照組

　　b p<0.05與氫處理后

　　兩組改善前后肝功能和HBV DNA

　　如表 3所示，CHB患者的ALT，TBiL和ChE與改善前健康受試者的ALT，TBiL和ChE顯著不同。

　　表3. 不同組改善前后的肝功能和HBV DNA

　　注意

　　一個(gè) p<0.05與前改善。

　　在CHB患者中，改善后ALT和TBiL降低，ChE顯著升高(p <0.01或0.05)。與常規(guī)改善組相比，氫改善組的肝功能保持相對(duì)不變(p > 0.05)，盡管ALT和TBiL略有降低，而ChE則略有增加。

　　改善后，盡管氫改善組中的HBV DNA降低了一定程度，但氫改善組中的HBV DNA 與常規(guī)改善組相當(dāng)(p > 0.05)。

　　討論區(qū)

　　我們的結(jié)果表明，富氫水處理可以改善CHB患者的氧化應(yīng)激，并且在接受氫綜合改善后，肝功能以及HBV DNA負(fù)荷有改善的趨勢(shì)。

　　在CHB中，肝細(xì)胞損傷的潛在機(jī)制很復(fù)雜，涉及炎癥和免疫誘導(dǎo)的損傷，其中ROS起重要作用。ROS包括超氧陰離子，單線態(tài)氧，羥基自由基，以及其他。

　　已發(fā)現(xiàn)ROS和活性氮物質(zhì)(RNS)歸因于包括病毒性肝炎在內(nèi)的多種肝臟疾病中的肝損傷。4項(xiàng)研究表明，氧化應(yīng)激(ROS，RNS)增加，但抗氧化能力是在患者的丙型肝炎損害。

　　此外，丙型肝炎患者具有增加的LPO在血清，肝臟和外周血單核細(xì)胞，谷胱甘肽降低，但血清和肝臟中的谷胱甘肽升高。在不同病理分期，LPO的程度也是不同的，并且已被發(fā)現(xiàn)涉及到肝炎的發(fā)病機(jī)理。

　　這些結(jié)果證實(shí)，氧化應(yīng)激是病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)理的主要貢獻(xiàn)者，這在本研究中也被證實(shí)為XOD和MDA(LPO的產(chǎn)物)增加而SOD和GST活性降低。由于病毒性肝炎患者存在氧化/抗氧化失衡，因此改善氧化應(yīng)激可能成為改善病毒性肝炎的有前途的策略。

　　盡管眾多的抗氧化劑(包括天然和合成的抗氧化劑已被鑒定)，有抗氧化劑的乙型肝炎，改善中的應(yīng)用尚未達(dá)成共識(shí)和一些抗氧化劑的具有可能的有害影響。

　　此外，在患有肝病或肝損傷的動(dòng)物中，口服制劑生物利用度差仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。因此，在臨床改善乙型肝炎時(shí)必須開(kāi)發(fā)無(wú)副作用或副作用最小的抗氧化劑。

　　近來(lái)，已經(jīng)證實(shí)氫在與氧化應(yīng)激有關(guān)的許多疾病中具有有效的抗氧化能力。2007年，Ohasawa等人。7首次發(fā)現(xiàn)氫可以選擇性中和·OH和ONOO –，兩個(gè)對(duì)組織損傷至關(guān)重要的自由基，對(duì)其他自由基沒(méi)有影響。

　　氫作為一種理想的抗氧化劑，具有一些優(yōu)勢(shì)：它可以穿透生物膜并擴(kuò)散到細(xì)胞質(zhì)，線粒體和細(xì)胞核中，從而能夠保護(hù)核DNA和線粒體。

　　氫的產(chǎn)物是水，使用氫不應(yīng)有嚴(yán)重的不良副作用;氫足夠溫和，不會(huì)干擾代謝氧化/還原反應(yīng)或破壞細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中涉及的ROS。另外，氫的收集相對(duì)容易，這使得氫處理便宜。

　　此外，盡管沒(méi)有明顯差異，但接受氫改善的患者與接受常規(guī)改善的患者相比，肝功能和HBV DNA水平的趨勢(shì)有所改善。這可能歸因于氫氣的短期處理。因此，需要進(jìn)一步進(jìn)行長(zhǎng)期用富氫水處理的研究，以確認(rèn)氫對(duì)肝功能的保護(hù)作用及其對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用。

　　總之，富含氫的水可能會(huì)減輕氧化應(yīng)激，并有可能改善CHB患者的肝功能并降低HBV DNA水平。
 

　　致謝

　　這項(xiàng)研究得到了國(guó)家自然科學(xué)基金(No. 81000493 / H0906)和上海市衛(wèi)生局青年計(jì)劃(No：2010Y0503)的支持。

　　夏春祥醫(yī)師

　　首次發(fā)表： 2013年6月13日 https://doi.org/10.1111/cts.12076
 

　　以上內(nèi)容摘自《孫學(xué)軍 氫思語(yǔ)》，僅限于知識(shí)科普，不代表對(duì)本公司產(chǎn)品的宣傳。