目的:研究氫分子對(duì)氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的影響,并探討可能的分子機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)鼠源RAW264.7巨噬細(xì)胞,處理前更換為飽和含氫培養(yǎng)基,分別給予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;5 mmol/L)和雷帕霉素(rapamycin,Rap;3μmol/L)預(yù)處理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)繼續(xù)培養(yǎng)24 h。分別采用MTT法和Annexin V-FITC雙染法檢測(cè)細(xì)胞活力和凋亡情況,試劑盒測(cè)定培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,Western blot法檢測(cè)自噬標(biāo)志分子beclin-1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表達(dá)的變化,激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞內(nèi)微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表達(dá)變化。結(jié)果:氫分子顯著抑制ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞活力降低、LDH漏出增加、細(xì)胞凋亡及CHOP表達(dá)上調(diào);ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞自噬反應(yīng),表現(xiàn)為beclin-1表達(dá)上調(diào),LC3顆?；奂?而氫分子可進(jìn)一步促進(jìn)ox-LDL對(duì)細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用,且氫分子的這種促進(jìn)作用可被自噬抑制劑3-MA拮抗,而被自噬誘導(dǎo)劑Rap增強(qiáng)(P<0.01)。

另外,氫分子對(duì)ox-LDL所致的巨噬細(xì)胞凋亡、細(xì)胞活力降低及CHOP上調(diào)的抑制作用也可被3-MA拮抗,而被Rap促進(jìn)。在體外培養(yǎng)的人源THP-1巨噬細(xì)胞中也觀察到類似的結(jié)果,即氫分子不僅可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和CHOP上調(diào),也可使beclin-1表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)(P<0.01)。結(jié)論:氫分子可通過(guò)下調(diào)CHOP表達(dá)抑制ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡,其上游機(jī)制可能是通過(guò)激活自噬實(shí)現(xiàn)的。