目的:探討氫分子對(duì)高糖狀態(tài)下腎小球系膜細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3表達(dá)水平的影響及其可能的機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)小鼠腎小球系膜細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(C組,5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇組(G組,5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高糖組(H組,25 mmol/L葡萄糖)和高糖+富氫水組(HH組,25 mmol/L葡萄糖+富氫水),培養(yǎng)48 h。采用Western blot法檢測(cè)Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)、血紅素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化還原酶1(NQO-1)的蛋白水平;RT-PCR檢測(cè)HO-1和NQO-1的mRNA表達(dá);超氧化物陰離子熒光探針二氫乙啶檢測(cè)活性氧簇(ROS)的水平;總超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒(WST-8法)檢測(cè)SOD活性。
結(jié)果:與C組比較,H組Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平增加,Bcl-2蛋白表達(dá)減少(P<0.05),而HH組上述蛋白表達(dá)水平與C組的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;與H組比較,HH組的Bax和cleaved caspase-3蛋白下調(diào),Bcl-2蛋白上調(diào)(P<0.05)。H組細(xì)胞內(nèi)的ROS水平較C組明顯增高,SOD活性較C組明顯降低(P<0.05),而HH組的SOD活性與C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;HH組細(xì)胞內(nèi)的ROS水平較H組明顯降低,SOD活性明顯高于H組(P<0.05)。與C組比較,H組的Nrf2蛋白以及HO-1和NQO-1 mRNA及蛋白表達(dá)均減少(P<0.05);HH組的Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白以及HO-1和NQO-1的mRNA表達(dá)均明顯高于H組(P<0.05)。結(jié)論:氫分子可抑制高糖狀態(tài)下腎小球系膜細(xì)胞促凋亡蛋白的表達(dá),同時(shí)誘導(dǎo)其抗凋亡蛋白的表達(dá),其機(jī)制可能與激活Nrf2信號(hào)通路有關(guān)。
